薄層掃描法測定胡黃連中香草酸和桂皮酸的含量

摘要:建立胡黃連中香草酸和桂皮酸的含量測定方法。方法用雙波長掃描法測定胡黃連中香草酸和桂皮酸的含量。結(jié)果香草酸。桂皮酸斑點(diǎn)基線構(gòu)成之面積稱峰面積。A＝×σ×h＝2.507σh＝1.064 Wh/2h>峰面積3Il內(nèi)穩(wěn)定，香草酸回收率為103.86％，RSD=1.33％，桂皮酸回收率為103.16％，RSD=1.28％。結(jié)論該方法穩(wěn)定，可行。具有實(shí)用性。
    關(guān)鍵詞：胡黃連;薄層掃描法;香草酸;桂皮酸
    胡黃連具有保肝利膽、抗炎、抗真菌等藥理作用。胡黃連含胡黃連素、胡黃連苷（I II III）、D-甘露醇、香草酸、肉桂酸、胡黃連醇成分。香草酸和桂皮酸是其中的兩種抗菌成分。我們對(duì)胡黃連中香草酸、桂皮酸含量建立了薄層掃描法，以達(dá)到控制胡黃連的質(zhì)量，從而為臨床療效提供保證。
    1 儀器與試劑
    藥材：胡黃連，太原市藥材公司；儀器：日本島津CS--9301PC薄層掃描儀；手提式熒光燈（上海固村電光儀器廠）；對(duì)照品：香草酸對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定所）；桂皮酸對(duì)照品溶液（省藥檢所提供e=0.604mg／50ml）；硅膠GF254（青島海洋化工廠）所用試劑均為分析純。
    2 實(shí)驗(yàn)條件
    2.l 薄層層析條件：分別以石油醚-氯仿-丙酮-冰醋酸（10：4.4：10.1）；正己烷-乙醚-冰醋酸（5：5：0.1）；正己烷-氯仿-乙醚-冰醋酸（5：3：2：0.1）以及氯仿：甲醇（2：1）展開，多次比較發(fā)現(xiàn)正己烷。氯仿-乙醚-冰醋酸（5：3：2：0.4）分離效果好。
    2．2 測定波長及主要掃描參數(shù)，分別對(duì)香草酸，桂皮酸對(duì)照品斑點(diǎn)在200nm-370nm掃描，在290nm處有zui大吸收，350nm處無吸收，固定350nm為參比波長，290nm為測定波長。
    3 線性關(guān)系
    3．1 精密稱取干燥至恒重的香草酸對(duì)照品適量，加甲醇制成lmg／ml的對(duì)照品溶液。精密吸取1、2、3,4、5μL點(diǎn)于同一塊薄層板上，展開測定，回歸方程為y=．039264+4.39133xl0-3x，r=0.9995,采用外標(biāo)兩點(diǎn)法計(jì)算。
    4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)
    分別取供試品溶液20μL，對(duì)照品均為5μL，點(diǎn)于同一薄層板上，展開，每隔l小時(shí)測一次，連續(xù)測3小時(shí)，結(jié)果3小時(shí)內(nèi)峰值基本不變。
香草酸X=969.375 RSD=0.24％
桂皮酸X=723.7l5 RSD=0.61％
    5 回收率實(shí)驗(yàn)
    5．1 取供試品溶液5μL．點(diǎn)四點(diǎn)，分別加人香草酸對(duì)照品l、2、3、4μL。結(jié)果香草酸回收率為103.86％，RSD=1.28%。
52 取供試品溶液lμL，點(diǎn)四點(diǎn)，分別加入桂皮酸對(duì)照品3、5、lO、l5、20μL山結(jié)果桂皮酸回收率103.16％。RSD=1.28％。
    搗碎藥粉加熱回流3小時(shí)（75％乙醇），過濾，回收乙醇，蒸干。殘?jiān)脷溲趸c35ml溶解，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，乙醚脫色兩次，每次20ml，水層用稀鹽酸調(diào)節(jié)PH 2-3。然后用乙醚提取4次（3Omlx2+20mlx2），合并乙醚液，用無水硫酸鈉脫水，蒸干得殘?jiān)?。用甲醇溶解，定容?Oml得供試品溶液。所得殘?jiān)?jīng)70％乙醇浸未見與香草酸和桂皮酸對(duì)照品相應(yīng)斑點(diǎn)。故說明藥物中香草酸與桂皮酸已提凈。
    4．4A：GF254板，點(diǎn)樣。樣品取6 μL-標(biāo)l。標(biāo)2均為6μl。展開劑：正己烷-氯仿-乙醚-冰醋酸（5：3：2：0.4）。
B：GF254板，點(diǎn)樣。樣品取l5μL，標(biāo)l，標(biāo)2均為5μL。
    6 討論
    6.1 實(shí)驗(yàn)首先作了單味胡黃連中香草酸和桂皮酸的含量測定。得香草酸0.5831％，桂皮酸0.4212％。（實(shí)驗(yàn)采取索氏提取法提取9次，得到樣品液。
    6.2 實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)薄層板活化與否對(duì)實(shí)驗(yàn)無影響。因?yàn)楣鹌に岷拖悴菟岫际撬嵝晕镔|(zhì)，本身極性很大。在硅膠板不活化的情況下展開劑的展開效果也很好。
    6.3 水提與醇提的比較：在提取胡黃連有效成分時(shí)，我們采取了兩種溶劑提取，在實(shí)驗(yàn)條件相同的情況下，發(fā)現(xiàn)水提取的成分含量低于醇提。
    分析：水提取物太雜，不僅提取了有效成分，同時(shí)又有甙，蛋白質(zhì)、鞣質(zhì)等造成過濾和萃取有很大差異，損失了很大量。兩種溶液提取比較發(fā)現(xiàn)醇提易于水提，兩者所提成分配成50 nll樣品液。醇提顯黑黃色，水提顯亮黃色。
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