首烏藤超微飲片的液相色譜指紋圖譜研究

【摘要】 目的研究首烏藤超微飲片的指紋圖譜。 方法色譜柱為大連依利特公司Hypersil BDS C18（4.6 mm×200 mm,5μm）。流動相為乙腈-1%冰醋酸,柱溫為35℃,流速為1.0 ml/min,檢測波長為254 nm，進樣量為20μl。結果初步建立了首烏藤超微飲片的HPLC指紋圖譜，標定了9個共有指紋峰。結論利用首烏藤超微飲片液相色譜（HPLC）指紋圖譜可以較好地反映首烏藤超微飲片的內在質量。

　　【關鍵詞】  首烏藤超微飲片 液相指紋圖譜 液相色譜法

　　Abstract:ObjectiveTo determine the HPLC fingerprint of Caulis Polygoni Multiflori. MethodsChromatographic column was Hypersil BDS C18 （4.6 mm×200 mm,5μm）. phase was acetonitrile-1% glacial acetic acid in water.Column temperature was 35℃, the Flow rate was 1.0 ml·min-1, the detection wavelength was 254 nm and the sample size was 20μl.ResultsThe fingerprint of Caulis Polygoni Multiflori was established and 9 common peaks were in the fingerprint.ConclusionThe method and data can be used to control the quality of the caulis polygoni multiflori.

　　Key words:Caulis Polygoni Multiflori；  Fingerprint；  HPLC

　　首烏藤為蓼科植物何首烏Polygonum multiflorum Thunb. 的干燥藤莖, 具養(yǎng)血安神，祛風通絡功能。用于失眠多夢，血虛身痛，風濕痹痛；外治皮膚瘙癢［1］。首烏藤的主要有效成分為大黃蒽醌。本文通過對四川、北京、湖南、江西、南京等10個不同地區(qū)的商品首烏藤藥材制成的超微飲片進行測定，建立指紋圖譜，并對首烏藤超微飲片中大黃素的含量進行了測定。

　　1  儀器與試劑

　　1.1  儀器

　　液相色譜儀（島津LC-10ATVP液相色譜儀，紫外檢測器SPD-10AVP，島津色譜工作站），AE240型電子分析天平。

　　1.2  試劑乙腈為色譜純，其它試劑均為分析醇，水為重蒸餾水。

　　1.3  對照品大黃素（ 供含量測定用,中國藥品生物制品檢定所提供）。

　　1.4  藥材

　　10批商品首烏藤藥材分別購自四川、北京、湖南、江西、南京等地。加工成超微飲片。

　　2  方法與結果

　　2.1  供試品溶液的制備取首烏藤超微飲片，取約0.5 g，精密稱定，加甲醇40 ml加熱回流提取2次，1 h/次，濾過，合并濾液，水浴蒸干，殘渣加甲醇使溶解，置25 ml量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

　　2.2  對照品溶液的制備取大黃素對照品約5 mg，精密稱定，置10 ml量瓶中，加甲醇使溶解并至刻度，搖勻，即得。

　　2.3  色譜條件色譜柱為大連依利特公司Hypersil BDS C18柱（4.6 mm×200 mm,5 μm）, 流動相為（A）乙腈-（B）1%冰醋酸,柱溫為35℃,流速為1.0 ml/min,檢測波長為254 nm，進樣量為20μl。流動相比例，見表1。表1  流動相比例（略）

　　2.4  方法學考察

　　2.4.1  精密度實驗取同一份首烏藤超微飲片的供試品溶液連續(xù)進樣5次，比較各共有指紋峰的相對保留時間與相對基線構成之面積稱峰面積。A＝×σ×h＝2.507σh＝1.064 Wh/2h>峰面積，結果表明各共有指紋峰的相對保留時間與相對峰面積基本一致，RSD＜2%，見表2～3，符合指紋圖譜的檢測要求［1］。表2  精密度實驗結果（略）表3  精密度實驗結果（略）

　　2.4.2  穩(wěn)定性實驗取同一份首烏藤超微飲片的供試品溶液，分別在制備后0，2，4，6，8 h進樣，比較各共有指紋峰的相對保留時間和相對峰面積，結果表明各共有指紋峰的相對保留時間和相對峰面積基本一致，RSD＜2%，樣品在8 h內穩(wěn)定，符合指紋圖譜的檢測要求。

　　2.4.3  重復性實驗取同一批首烏藤超微飲片樣品5份，分別按供試品溶液制備方法制備供試品溶液，進行測定，比較各共有指紋峰的相對保留時間和相對峰面積，結果表明各共有指紋峰的相對保留時間和相對峰面積基本一致，RSD＜2%，符合指紋圖譜的檢測要求。

　　2.5  指紋圖譜的建立

　　2.5.1  共有指紋峰的標定采用相對保留時間標定共有指紋峰，以圖譜中大黃素為參照物，將各拖尾峰（tailing peak）。前者少見。>色譜峰保留時間與同一圖譜中參照物的保留時間比較，其比值為各色譜峰的相對保留時間（見表4），計算10批不同地區(qū)藥材制成的超微飲片指紋圖譜中各色譜峰的相對保留時間，其中9個色譜峰為各樣品所有，故標定它們?yōu)楣灿兄讣y峰。各共有指紋峰的相對保留時間分別為：峰-1（0.112 2）、峰-2（0.155 9）、峰-3（0.251 5）、峰-4（0.267 1）、峰-5（0.380 8）、峰-6（0.404 1）、峰-7（0.447 9）、峰-8（0.535 0）、峰-S（1.000 0）。表4  10批首烏藤超微飲片各共有峰的相對保留時間（略）

　　2.5.2  共有指紋峰的相對峰面積以圖譜中大黃素為參照物，將各色譜峰峰面積與同一圖譜中參照物的峰面積比較，其比值為各色譜峰的相對峰面積，見表5。表5  10批首烏藤超微飲片樣品部分共有峰的相對峰面積（略）

　　2.6  15批首烏藤超微飲片由于產地不同，其大黃素的含量也有差別見表6。表6  樣品的來源及大黃素含量（略）

　　2.7  相似度計算采用中南大學“計算機輔助相似性評價系統(tǒng)”進行相似度計算。10批樣品的相似度均在0.9以上。

　　3  討論

　　超微飲片是我院研制的一種新型飲片，采用指紋圖譜技術控制其質量具有較強的專屬性。

　　參照物的選擇：首烏藤超微飲片中大黃素的含量較高, 因此選擇其作為參照物，在圖譜中為S號峰。各樣品的中的大黃素參照峰是根據(jù)其保留時間與大黃素的保留時間基本一致而確定的。

　　色譜柱選擇：分別用依利特C18色譜柱（4.6 mm×200 mm，5μm）與 MetaChem C18色譜柱（4.6 mm×200 mm 5μm）兩種色譜柱進行首烏藤超微飲片指紋圖譜分析，結果表明，依利特C18色譜柱（4.6 mm×200 mm，5μm）分離效果較好，故選擇依利特C18色譜柱。

　　測定結果表明不同地區(qū)的大黃素含量差異較大，可能是生長條件及加工方法不同而致。應通過對多地區(qū)多批次樣品進行含量測定，制定適宜的含量限度，確保超微飲片的質量。

　　【參考文獻】

　　［1］國家藥典委員會.中國藥典,Ⅰ部［J］.北京：化學工業(yè)出版社，2000：201